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TRATAMIENTO CON CÉLULAS MADRE DE MEMBRANA AMNIÓTICA MURINA EN HEMOFILIA A.
Autores:
ANA ISABEL GARCIA GUILLEN
, PAOLA A. ROMECÍN DURÁN,
ESTHER MARÍA GARCÍA NAVARRO
,
MIGUEL BLANQUER BLANQUER
,
FAUSTINO GARCÍA CANDEL
,
JOSE MARIA MORALEDA JIMÉNEZ
,
JOAQUÍN GARCÍA-ESTAÑ LÓPEZ
,
NOEMI MARIN ATUCHA
,
Grupos de investigación:
[GI/IMIB/C061/2011] TRASPLANTE HEMATOPOYÉTICO / TERAPIA CELULAR
Comunicación:
Antecedentes:
La hemofilia A es una enfermedad congénita recesiva que tiene como consecuencia la deficiencia del factor VIII (FVIII) de coagulación dando lugar a la aparición de hemorragias internas y externas en estos pacientes. El tratamiento actual se basa en la terapia de sustitución del factor por perfusión intravenosa de manera periódica, lo cual resulta incómodo además de tener riesgos atribuibles al tratamiento exógeno, como puede ser la producción de anticuerpos frente el factor infundido. Recientemente, se ha encontrado que las células estromales mesenquimales (MSC) tienen capacidad de producir FVIII. Además se ha descrito que las MSC de líquido amniótico humano expresan FVIII y su transportador plasmático, el factor de von Willebrand (vWF), que normalmente solo se expresa en el endotelio vascular. Por todo ello y teniendo en cuenta la necesidad de estudio preclínicos que certifiquen la seguridad y efectividad de los diversos tratamientos, nuestro objetivo fue evaluar el trasplante de células madre de membrana amniótica murina (MAm) de individuos sanos en un modelo murino de hemofilia A severa, como estudio de seguridad y eficacia del trasplante sobre la expresión de factor VIII hepático.
Métodos:
La caracterización de las células madre de la membrana amniótica murina (CM-MAm) se llevó a cabo por citometría de flujo, estudiando la expresión de FVIII y vWF mediante técnicas de RT-PCR e inmunofluorescencia. Los donantes de CM-MAm fueron ratones C57BL/6 GFP+ y los receptores alogénicos ratones C57BL6/129 con hemofilia A severa no inmunodeprimidos. El trasplante se realizó en dos grupos experimentales: en uno de los grupos (n=38), se inyectaron las células vía intraportal, mientras que en el segundo grupo (n=37), la infusión de las células se realizó vía intraperitoneal. Los animales fueron sacrificados a diversos tiempos: 1, 2, 4 y 8 semanas, 6 meses y 1 año, en ambos grupos. La expresión de FVIII en los hígados de los animales trasplantados, se estudió mediante técnicas de RT-PCR e inmunofluorescencia.
Resultados:
Las CM-MAm fueron positivas para los marcadores de células madre CD44, CD73, CD90 y CD105, y marcador de proliferación Ki67; y negativas para los marcadores de célula madre hematopoyética CD34 y CD45. Además, estas células tienen una expresión positiva para FVIII y vWF en cultivo in vitro. La síntesis de FVIII en los hígados de ratones trasplantados se observó en la mitad de las muestras de los animales sacrificados a las dos semanas tras la inyección intraportal, expresión que se mantiene hasta 1 año post-infusión. En el grupo de inyección intraperitoneal, la expresión de FVIII se observó en un 50 % de los ratones a los 6 meses post-infusión, expresión que se pierde tras 1año post-infusión.
Conclusiones:
El trasplante alogénico de CM-MAm en el modelo animal de hemofilia A severa produce expresión hepática de RNAm de FVIII incluso 1 año tras la infusión intravenosa. Las CM-MAm resultan una fuente potencial de FVIII y vWF que podría tener gran importancia para el tratamiento en hemofilia A severa.
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