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AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIÓN DE LA MEMBRANA AMNIÓTICA MURINA.
Autores:
ANA ISABEL GARCIA GUILLEN
, ÁNGELA SORIANO FILIU,
ESTHER MARÍA GARCÍA NAVARRO
, PAOLA A. ROMECÍN DURÁN,
MARÍA DE LA PAZ QUESADA RICO
,
JOSE MARIA MORALEDA JIMÉNEZ
,
JOAQUÍN GARCÍA-ESTAÑ LÓPEZ
,
NOEMI MARIN ATUCHA
,
Grupos de investigación:
[GI/IMIB/C061/2011] TRASPLANTE HEMATOPOYÉTICO / TERAPIA CELULAR
[GI/IMIB/C041/2011] Regionalizacion cerebral y genes del desarrollo
Comunicación:
Antecedentes:
La membrana amniótica humana ha resultado ser una fuente rica en células madre mesenquimales con características de pluripotencialidad, pudiendo diferenciarse in vitro a las diferentes líneas germinales, un alto potencial proliferativo e inmunomodulador, y baja inmunogenicidad in vivo. Estas propiedades hacen de la membrana amniótica un importante objeto de estudio para terapia celular y regenerativa. Teniendo en cuenta la necesidad de estudios preclínicos en modelos animales de enfermedad, consideramos importante estudiar las propiedades de la membrana amniótica murina (MAm) y de sus componentes celulares para su posterior uso en dichos estudios.
Métodos:
Las MAm fueron cuidadosamente aisladas de ratonas C57BL/6 preñadas en diferentes estadíos de gestación. Sobre el tejido recolectado, mediante tinción May-Grünwald/Giemsa, se observó la morfología de las diferentes capas celulares que componen la MAm. Se llevó a cabo un estudio de la evolución del tamaño de las células que forman la capa epitelial en membranas de diferentes estadíos de gestación provenientes de animales C57BL/6 GFP+, mediante la medición del área celular. Diferentes marcadores de células madre mesenquimales y epiteliales, de pluripotencialidad y proliferación se estudiaron mediante las técnicas de RT-PCR e inmunofluorescencia.
Resultados:
Tras la tinción y estudio morfológico, se observó que la MAm está compuesta por dos capas: una capa epitelial de células cuboides y una capa estromal mesodérmica formada por células con morfología fibroblastoide. Observamos que las células que componen la capa epitelial aumentan de diámetro con respecto al estadío de gestación. Mediante el estudio del genotipo y del fenotipo de la MAm, se obtiene una expresión positiva para los marcadores de células madre CD90, CD44, CD105 Y CD73; marcadores de células madre epiteliales E-cadherina y citoqueratina y marcadores de células madre mesenquimales Vimentina y N-cadherina. Estas células expresan a su vez el marcador de proliferación Ki67 y marcadores de pluripotencialidad como Slug, Nanog, Sox2 y Oct3/4.
Conclusiones:
La MAm es una fuente de células madre epiteliales y mesenquimales con una expresión positiva para marcadores de proliferación y pluripotencialidad. Estas propiedades, que presentan cierta similitud con la membrana amniótica humana, permiten que la MAm sea diana de diversos estudios preclínicos en terapia celular, con objeto del desarrollo de futuras terapias en humanos en base a un tejido fácil de obtener y sin complicaciones éticas como es la membrana amniótica.
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