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PERFILES DE EXPRESIÓN DE MIRNAS EN LEUCEMIA LINFOCÍTICA CRÓNICA: IDENTIFICACIÓN DE MIRNAS INDUCIDOS POR LA IL-4
Autores:
ANTONIO PARRADO GONZÁLEZ
, NATALIA RUIZ LAFUENTE,
MARÍA JOSÉ ALCARAZ GARCÍA
,
SILVIA SEBASTIÁN RUIZ
,
AZAHARA MARÍA GARCÍA SERNA
, JOAQUÍN GÓMEZ ESPUCH,
JOSE MARIA MORALEDA JIMÉNEZ
,
ALFREDO MINGUELA PURAS
,
ANA MARÍA GARCÍA ALONSO
,
Grupos de investigación:
[GI/IMIB/C006/2011] INMUNOLOGÍA E INMUNOTOLERANCIA EN TRASPLANTES Y ENFERMEDADES DE BASE INMUNOLÓGICA
[GI/IMIB/C061/2011] TRASPLANTE HEMATOPOYÉTICO / TERAPIA CELULAR
[GI/IMIB/C005/2011] Investigación en Epidemiología y Salud Pública
Comunicación:
Antecedentes:
La interleucina 4 (IL-4) es una citocina producida, entre otras células, por los linfocitos T, los cuales interaccionan estrechamente con las células B malignas de la leucemia linfocítica crónica (LLC), que proliferan en su propio nicho microambiental, los pseudofolículos de los órganos linfoides periféricos. La IL-4 estimula la diferenciación y la supervivencia de las células LLC-B. Los microRNAs (miRNAs) son genes que dan lugar a tránscritos de RNA no codificantes para proteína. En su forma madura, los miRNA tienen 19-25 nucleótidos de longitud, y forman parte de complejos ribonucleoproteicos que reprimen la expresión génica mediante degradación de ARN mensajero e interferencia con la traducción de proteínas dependiente de la complementariedad de su secuencia. Este mecanismo se denomina interferencia por RNA. Cada miRNA puede reprimir la expresión de hasta varios cientos de genes. Los miRNAs pueden funcionar como oncogenes y genes supresores de tumores. El objetivo de este trabajo ha sido estudiar el perfil de miRNA maduros en células LLC-B y su respuesta al tratamiento in vitro con IL-4.
Métodos:
Los perfiles de expresión de miRNAs fueron realizados mediante micromatrices de oligonucleótidos (microarrays), utilizando una plataforma comercial de Agilent Technologies, que mide los niveles de 866 miRNAs maduros humanos y 89 miRNAs virales. Se utilizaron muestras de sangre de 16 pacientes con LLC y de 3 controles con hematopoyésis normal. En ambos casos se purificaron los linfocitos B, obteniéndose RNA total rico en miRNA directamente de la muestra sin tratar así como tras cultivo durante 18 horas en presencia y ausencia de 10 ng/ml de IL-4. Los genes regulados por la IL-4 fueron validados por qPCR. Los niveles de apoptosis de los linfocitos B cultivados se midieron por citometría de flujo. Las diferencias basales entre linfocitos B normales y LLC-B se analizaron mediante la t de Student, la identificación de genes regulados por la IL-4 mediante ANOVA, y las correlaciones entre los niveles de citoprotección y los incrementos de expresión de miRNAs por IL-4 mediante regresión lineal.
Resultados:
Se detectaron 129 miRNAs maduros expresados consistentemente en células LLC-B, y 149 en linfocitos B normales. Entre ellos, 41 se expresaron diferencialmente entre ambos, 29 sobreexpresados y 12 infraexpresados en LLC-B. Además, 6 miRNAs presentaron una expresión disminuida en pacientes con el marcador de mal pronóstico ZAP-70. La IL-4 indujo miR-21 (3p and 5p), pasajero del gen VMP1, y miR-362 (3p y 5p), miR-500a (3p), miR-502 (3p), y miR-532 (3p y 5p), pasajeros del gen CLCN5. Según un estudio previo (Ruiz-Lafuente et al, PLOS ONE 2014), VMP1 y CLCN5 se inducen por IL-4, sugiriendo que los miRNAs se inducen pasivamente con sus portadores. Curiosamente, sus incrementos se correlacionaron con citoprotección.
Conclusiones:
MiR-21 se ha descrito como factor leucemogénico, asociado a mal pronóstico en LLC y el miRNA más recurrentemente sobreexpresado en cáncer. La regulación positiva de miR-21 y los miRNAs pasajeros del locus CLCN5 por IL-4 podrían contribuir a la evasión de la apoptosis de las células LLC-B. Estos hallazgos indican que la ruta de la IL-4 y los miRNAs inducidos por la IL-4 representan dianas prometedoras para el desarrollo de nuevas terapias en la LLC.
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